بررسی پروتئین helicobacter pylori oipa به منظور تولید پروتئین نوترکیب برای اهداف ایمونولوژیک

thesis
abstract

پروتئین oipa (outer inflammatory protein a) یکی از مهمترین ادهزین‏های h. pylori و کاندید مناسبی برای ساخت واکسن است. ژن آن تحت تنظیم وضعیت on-off در ارتباط با بیان پروتئین oipa است. هدف از این مطالعه به دست آوردن یک کلون نوترکیب (با وضعیت on) از یک ایزوله بالینی h. pylori با میزان بیان بالا برای پروتئین غشای بیرونی (omp) با وزن مولکولی kda 35-33 است. برای تکثیر ژن oipa از سویه ایرانی، پرایمر اختصاصی این ژن بر اساس توالی oipa سویه استاندارد b8 h. pylori طراحی شد و با استفاده از این پرایمر ژن تکثیر و محصول pcr جهت تعیین توالی به genebank ارسال شد. پلاسمید pet28a و e. coli dh5α برای همسانه سازی و ترانسفورماسیون انتخاب شد. به منظور بیان پروتئین پلاسمید نوترکیب حاوی ژن oipa (pet28a-oipa) در e. coli bl21(de3) ترانسفورم شد. پروتئین‏ oipa از باکتری جداسازی و تخلیص شد و حضور پروتئین oipa با استفاده از آنتی‏بادی مونوکلونال آنتی his-tag و آنتی بادی اختصاصی بر علیه پروتئین 35-33 کیلودالتون تأیید گردید. کارایی محافظتی پروتئین oipa و بره‏موم به عنوان ادجوان در محافظت از موش c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori تعیین شد. چهار گروه از موش‏ها به صورت مخاطی پروتئین oipa (واکسن)، پروتئین oipa و بره‏موم (واکسن- آدجوان)، بره‏موم (آدجوان) و pbs (کنترل) را دریافت کردند. سویه h. pylori b19 (caga+/vacas1m2) که از نمونه بیوپسی با علائم بالینی التهاب شدید گرفته شده بود، به طریق داخل معده‏ای برای آزمایشات ارزیابی ایمنی در موش استفاده شد. کولونیزاسیون h. pylori، شاخص التهاب در معده و میزان تیتر iga در سرم خون موش‏ها با روش شمارش باکتری (cfu)، پروتوکل‏های هیستوپاتولوژیکی استاندارد و الایزا تعیین گردید. توالی ژن oipa حضور قطعه 924 جفت بازی مرتبط با پروتئینی با وزن مولکولی 34 کیلودالتون را نشان داد (kj816695). میزان مشابهت ژن oipa با سایر ژنهای oipa منتشر شده در ncbi برابر 96-92% تعیین گردید. بیشترین مشابهت با کلون oipa مکزیکی مشاهده شد. میزان بار باکتریایی و شاخص التهاب به طور مشخصی در گروه موش‏های کنترل در مقایسه با گروه واکسن (oipa) بالاتر بود. تیتر iga آنتی oipa به طور مشخصی در گروه واکسن در مقایسه با سایر گروه‏ها بالاتر بود. در گروه بره‏موم، کاهش کمتری در بار میکروبی و شاخص التهاب در مقایسه با گروه واکسن مشاهده شد، اما به طور مشخصی از گروه کنترل پایین‏تر بود. بنابراین بره‏موم به تنهایی ممکن است به طور جزئی از موش‏های c57bl/j در مقابل عفونت h. pylori محافظت ‏کند. تجویز خوراکی بره موم به عنوان آدجوان همراه با واکسن oipa نسبت به واکسن به تنهایی اثر آدجوانی یا افزایشی نشان نداد. در واقع بره‏موم در مقابل از اثرات مؤثر واکسیناسیون پروتئین oipa جلوگیری کرد. یک توضیح حضور ترکیبات فنولیک، فلاونوئیدی یا سایر ترکیبات موجود در بره‏موم است که می‏تواند روی ساختار آنتی‏ژنیک پروتئین oipa اثر بگذارد و از فعال شدن ایمنی مخاطی توسط oipa جلوگیری کند. نتایج حاصل از این پژوهش بر نقش مهم oipa در بیماریزایی h. pylori تأکید دارد و oipa را به عنوان یک کاندیدای خوراکی در مقابل عفونت h. pylori معرفی می‏کند.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

بررسی پروتئین شوک حرارتی a (hspa) helicobacter pylori به منظور تولید پروتئین نوترکیب برای اهداف ایمونولوژیک

lactococcus lactis یک باکتری پروبیوتیک بی خطر است که پتانسیل بالایی برای کلونینگ آنتی ژن های مختلف از جمله پروتئین های h. pylori را داراست. در بین آنتی ژن های مختلف برای تولید واکسن علیه عفونت h. pylori ، پروتئین شوک حرارتی a (hspa) یکی از کاندیداهای ارزشمند است که به وسیله همه سویه های h. pylori بیان می شود و زمانی که به صورت خوراکی به موش تلقیح می شود، واکنش های نامساعد را ایجاد نمی کند. هدف ...

(oipA) of Helicobacter pylori

MICROBIOLOGY. For the article ‘‘A Mr 34,000 proinflammatory outer membrane protein (oipA) of Helicobacter pylori’’ by Yoshio Yamaoka, Dong H. Kwon, and David Y. Graham, which appeared in number 13, June, 20, 2000, of Proc. Natl. Acad. Sci. USA (97, 7533–7538), the authors note the following correction. The sequence of the HP0638 gene was incorrect as published. The sequence published was 59-GCT...

full text

پیشرفت های اخیر در تولید پروتئین های نوترکیب

تولید پروتئین‏ها‏‏ی نوترکیب یکی از مهمترین دستاوردهای زیست فناوری در قرن بیستم است. استفاده از قدرت طبیعی سلول‏ها‏‏ی میزبان پروکاریوتی و یوکاریوتی در بیان پروتئین‏ها‏‏ی نوترکیب باعث توسعه صنایع چند میلیارد دلاری شده است. پروتئین‏ها‏‏ی نوترکیب اهمیت بسیار زیادی برای کاربرد‏ها‏ی پزشکی پیدا کردهاند. اکثر پروتئین‏ها‏‏ی نوترکیب دارویی در سلول‏ها‏‏ی پستاندارن تولید می‏‏شوند، با این حال باکتری اشریشیا...

full text

تولید پروتئین نوترکیب lin28

امروزه فناوری تولید پروتئین های نوترکیب جهت تولید پروتئین های به لحاظ بیولوژیک ارزشمند در مقیاس زیاد و قابل تخلیص به کار می رود. عملکرد پروتئین lin 28، به عنوان یک فاکتور رونویسی نقش مهمی در پرتوانی سلول های بنیادی و زمان بندی تکامل دارد. تولید این پروتئین با هدف کاربرد آن در دانش سلول های بنیادی، هدف این مطالعه قرار گرفت. در این تحقیق در ابتدا ژن پروتئین lin 28 انسانی از سلول های بنیادی جنینی...

15 صفحه اول

تولید باکتریایی پروتئین نوترکیب کیتیناز از باکتری ترموفیل Paenibacillus ehimensis

کیتین، دومین بیوپلیمر فراوان در طبیعت بعد از سلولز و جزء اصلی کوتیکول حشرات و پوسته سخت پوستان است و دیواره سلولی بیشتر قارچها و بعضی از جلبکها و نیز نماتدها را تشکیل می‌دهد. مقادیر زیادی کیتین به شکل باقیمانده تجزیه ناپذیر بدن بسیاری از جانداران وارد طبیعت می‌شود که باعث آلودگی محیط زیست می‌گردد. می‌توان پس از تجزیه این پلی ساکارید با آنزیم کیتیناز از آن در جنبه‌های مختلف زندگی بهره جست. کیتین...

full text

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023